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島津納升液相色譜儀Prominence nano
島津納升液相色譜儀Prominence nano

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日本

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廣州領(lǐng)拓貿(mào)易有限公司

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Prominence nano 納升液相色譜儀

Prominence nano系列是一套納升LC系統(tǒng),可在納升流量下進(jìn)行流速的溶劑輸送。按照應(yīng)用不同,可以配置成1D和2D系統(tǒng)。

Prominence nano具備納升流速下的高保留時(shí)間重復(fù)性,非常低的系統(tǒng)死體積和極低的交叉污染等特點(diǎn)。

基本性能

納升流速傳感器可保證精確的納升溶劑傳輸

LC-20AD nano采用了新的RFC技術(shù),可對每一個(gè)泵進(jìn)行獨(dú)立的流速控制,在納升流速下保證好的流量精度。**的RFC系統(tǒng)是由高精度的納升流速感應(yīng)器控制,確保在任何時(shí)間的流速測量。同時(shí),流量傳感器配置了精確的溫度控制機(jī)制,以減少不確定的環(huán)境因素對溶劑輸送的影響。LC-20AD nano在梯度分析能保證很好的流速穩(wěn)定性,在300nL/min時(shí)候保留時(shí)間重復(fù)性的RSD小于0.2%。

RFC系統(tǒng)的原理

泵內(nèi)配置了一個(gè)流速傳感器,可持續(xù)監(jiān)測泵輸出的納升流速。為了保證流速在設(shè)定的范圍內(nèi),輸液泵采用反饋控制模式,傳感器的監(jiān)測到真實(shí)流速后可以自動(dòng)調(diào)整分流比例,從而保證流速的準(zhǔn)確性。另外,分流后的流動(dòng)相在混合前就經(jīng)過回流管路回到溶劑瓶,不會(huì)浪費(fèi)溶液。

低溶劑消耗

RFC系統(tǒng)可確保每個(gè)泵輸出的溶劑分流后又回到流動(dòng)相瓶中。就算在高壓梯度分析中,兩種溶劑在分離后并不會(huì)像廢棄物一樣排出,從而降低溶劑消耗并減少對環(huán)境的影響。

FCV納升閥,低死體積

FCV nano

FCV納升閥體積為25nL,在納升范圍內(nèi)幾乎不會(huì)展寬。在納升LC使用捕集柱進(jìn)樣和二維系統(tǒng)中,F(xiàn)CV 納升閥是不可或缺的。FCV 納升閥通過使用強(qiáng)化的定子和聚醚醚酮的轉(zhuǎn)子,可以大大降低樣品的吸附,同時(shí)獲得很好的耐用性。

高靈敏度分析

SIL-20AC

SIL-20AC的直接進(jìn)樣功能與FCV納升閥的低擴(kuò)射性能相結(jié)合可實(shí)現(xiàn)微量體積樣品的進(jìn)樣分析。FCV納升閥后連接的捕集柱可以對進(jìn)樣的樣品進(jìn)行捕集濃縮,從而實(shí)現(xiàn)高靈敏度分析。而且,SIL-20AC被公認(rèn)為交叉污染低的自動(dòng)進(jìn)樣器,這些特征都可以滿足高靈敏度MS分析的要求。

輔助控制軟件

2維LC的輔助控制軟件

輔助控制軟件可對2維LC進(jìn)行便捷設(shè)置,在軟件圖形界面上可輕松對2維HPLC的進(jìn)行復(fù)雜梯度編程,設(shè)定流速等,然后生成方法文件并下載至儀器中進(jìn)行控制,而圖形化的流路圖和梯度曲線代表當(dāng)前狀態(tài)。簡便的設(shè)置可避免單獨(dú)使用LC控制軟件帶來的一系列的操作問題。

Prominence nano 2D系統(tǒng)在線的結(jié)合了離子交換和反向色譜模式(如下圖所示),每種色譜模式都獨(dú)立運(yùn)行,兩種模式的結(jié)合可進(jìn)行有效的分離。Prominence nano 2D系統(tǒng)可與配備Nano ESI源的LCMS系統(tǒng)聯(lián)用進(jìn)行濕法蛋白組學(xué)分析,也可以與點(diǎn)靶儀和MALDI-TOF質(zhì)譜聯(lián)用進(jìn)行干法蛋白組學(xué)分析。

易操作的一維體系

Nano-Assist一維LC設(shè)置圖

1D 納升LC系統(tǒng)對于確認(rèn)SDS PAGE分離前的蛋白質(zhì)十分有效,1D系統(tǒng)只需要非常簡單的操作就可以實(shí)現(xiàn)。當(dāng)然,輔助控制軟件在1D和2D系統(tǒng)中使用都是十分方便的。

應(yīng)用

高保留時(shí)間重復(fù)性

蛋白質(zhì)組分析需要比較不同樣本的色譜峰差異,而樣本中又存在許多特征相似的多肽,對保留時(shí)間的重復(fù)性要求非常高。Prominence nano系統(tǒng)的高重復(fù)性可保證蛋白質(zhì)組分析的高精數(shù)據(jù),配置了RFC系統(tǒng)的LC-20AD nano可以在流速為300 nL/min獲得RSD不超過0.2% 的保留時(shí)間重復(fù)性。

牛血清白蛋白(BSA)酶解樣品的重復(fù)性

2維 LC的高分辨率

牛血清白蛋白(BSA)酶解樣品的重復(fù)性

在蛋白質(zhì)組學(xué)分析時(shí),單一的1D反相分離不足以提供足夠的色譜峰容量;所以,為了實(shí)現(xiàn)復(fù)雜樣品的分離,需要進(jìn)行2D分離以保證足夠的峰容量。Prominence nano系統(tǒng)可以進(jìn)行2D分析,結(jié)合陽離子交換和反相模式,為蛋白質(zhì)組學(xué)分析提供所需的核心技術(shù)。下圖為200fmol酵母蛋白質(zhì)的分析圖,1D分離中的未分離組分在2D中繼續(xù)分離成幾個(gè)組分,2D分離的峰容量大大大于1D所獲得的效果。

分析條件

1維

PolysulfoethylA (50mmL.×1mmI.D.)

流動(dòng)相

甲酸銨緩沖液

濃度STEP梯度

流速

40 nL/min

捕集柱

(5 mmL.×300 ?m I.D.)

L-column (micro)

捕集時(shí)長

5分鐘

脫鹽溶劑

水/蟻酸=100/0.1

脫鹽流速

L/min

脫鹽時(shí)長

5分鐘

2維

PicoFrit (100 mmL.×75 ?m I.D.)

流動(dòng)相

梯度洗脫

A)水/乙腈/蟻酸=98/2/0.1(v/v) B) 水/乙腈/蟻酸=5/95/0.1(v/v)

流速

600nL/min

溫度

溫度

檢測

LCMS-IT-TOF

樣本

酵母蛋白中的蛋白

(相當(dāng)于200 fmol的)

* 分別利用1維和2維中不同類型的柱體進(jìn)行其他組合的分離模式也是可行的。在這種情況下,分離或檢測方法由于使用的移動(dòng)相分離模式或類型之間的相互作用,可能會(huì)有一些限制。

連接MALDI-TOFMS使用

Prominence nano系統(tǒng)不僅僅可以通過nano ESI接口連接LCMS使用,還可連接到配有自動(dòng)點(diǎn)靶儀的MALDI-TOFMS儀器。為了準(zhǔn)確分析MALDI靶的每個(gè)色譜峰,需要LC能夠在1nL到1μL范圍之內(nèi)精確控制流速,Prominence nano系統(tǒng)的完全滿足了此需要。

酶解BSA樣品的UV色譜圖(500fmol)

分析條件

檢測器

UV220 nm

MonoCap for Fast-flow 快速M(fèi)onoCap

(250 mmL. × 100 μm I.D.)

流動(dòng)相

1、水/乙腈/蟻酸=98/2/0.1(v/v) B) 水/乙腈/蟻酸=5/95/0.1(v/v)

2、梯度洗脫

流速

1 μL/min

溫度

環(huán)境溫度

捕捉柱

ODS (1 mmL. × 0.5 mm I.D.)

點(diǎn)靶間隔

12 秒的點(diǎn)斷

每點(diǎn)液體:200nL(不包括基質(zhì))

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